Browsing by Author "謝宜庭"

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    以平行反應監測質譜法定量分析肝癌之醣蛋白生物標記
    (2019) 謝宜庭; Hsieh, Yi-Ting
    肝癌在癌症中致死率為第三名。然而，目前診斷肝癌的工具的靈敏度及專一性有限。甲型胎兒蛋白是目前臨床上常使用的生物標記蛋白，然後在40%的肝癌病患濃度卻是比較低的 (2 ng to 20 ng/mL )，造成誤判此需要一個好的血清標記作為肝癌的診斷，特別是針對肝癌初期的病患，因為在早期癌症是沒有症狀的。 蛋白質的醣基化修飾的疾病生物標的已廣受積極探討，因為醣基化的表現量與其結構異質性之變異已與包含癌症等幾種疾病有關。此研究中，我們嘗試針對肝癌（HCC）的生物標的蛋白紅血球結合蛋白 (Haptoglobin，Hp）中的位點特異性糖基化進行量化。我們的團隊於先前已經利用非靶向質譜方法（untargeted-MS）和生物資訊分析找出可能在肝癌患者中具有表現上升的 19 個Hp 特殊醣型。為了驗證這些可能的醣胜肽，在此論文第一部份，我們開發了一種奈米探針結合質譜的技術，平行反應監測（PRM-MS），以應用於這19 個醣胜肽依據不同的醣胜肽修飾 (價數，氧化，鈉的加合物) 衍生出49個衍生物醣胜肽的定量。利用以血紅蛋白修飾的磁性奈米探針（MNP@Hb）從血清中純化出 Hp，經由酵素水解消化後，再進行親水性作用層析法 (Hydrophilic interaction chromatography，HILIC) 將醣胜肽做進一步分離與濃縮。在質譜技術方面，為了減少干擾物的干擾，每條醣胜肽都有最佳的分離窗口， 有干擾勿干擾的醣胜肽前驅物就會選擇狹小的分離窗口 0.7 Da 到 1.2 Da； 沒有干擾勿干擾的前驅物就會選擇1.4 Da 的分離窗口。在此論文的第二部分，將此方法應用於 51個肝炎，54個肝硬化、34個低濃度甲型胎兒蛋白 (20 ng/mL)的肝癌和17個高濃度甲型胎兒蛋白(>20 ng/mL)。利用SDS-PAGE及銀染，來檢測血紅蛋白修飾的磁性奈米探針（MNP@Hb）對紅血球單白標準品的純化效率，其純化效率約為85% 到100%。血紅蛋白修飾的磁性奈米探針2的最大純化量是 5μg。在醣胜肽的平行反應監測質譜法定量的方面，是利用碎片離子的總和及使用內標準品 (SGP) 校正醣胜肽含量。在這些疾病群中，有條醣胜肽在位點N184上的兩個分支含有核心岩藻醣基化和雙唾液酸的醣型 (GP15, m/z: 1045.43 (4+), A4G5F1S2 醣型)，在肝癌中的含量明顯上升 (p value : 0.064)。有三條在位點N184的醣胜肽 (GP13、GP40、GP47)，在高濃度甲型胎兒蛋白是明顯上升的 (p value 分別為0.031、0.034、0.0342)。在未來我們希望這四個可能的醣胜肽可以與其他標記蛋白像是甲型胎兒蛋白，提供肝癌診斷的平台 。