Browsing by Author "賴承煜"

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    固定化鐵離子親合層析質譜技術之蛋白質磷酸化研究
    (2005) 賴承煜; LAI CHEN-YU
    蛋白質磷酸化在細胞訊息傳遞及功能調控上扮演關鍵角色。雖然目前已發展數種鑑定蛋白質磷酸化的方法，但要觀察到細胞內所有的蛋白質的磷酸化仍有一段很長的距離。這是由於蛋白質的磷酸化是一個動態現象，在細胞內的含量低，並且位置也會有所不同。為了要解決這樣的困難，發展更有效的分析蛋白質磷酸化的方法仍是一個重要的課題。 在本論文中，我們結合次細胞分離法(subcellular fractionation),凝膠電泳（SDS-PAGE）,金屬親和層析 ( immobilized metal affinity chromatography,IMAC),質譜 (mass spectrometry, MS)等技術分析複雜蛋白質樣品中所含的磷酸化蛋白，並針對其中IMAC 對於磷酸化胜的容量，專一性，沖提體積以及條件作細部的探討以及最佳化。為了證明此分析平台的可用性，我們將其應用在分析Ｔ細胞中的磷酸蛋白上。實驗中在細胞質中在603 個蛋白質中發現了782 個磷酸化胜及891個磷酸化的位置，在所有鑑定出的胜中，磷酸化胜佔百分之九十。此平台能廣泛應用在分析大量蛋白質磷酸化的研究上。