Browsing by Author "史哲維"

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    脊髓小腦運動失調症第十七型：微生物模型之藥物篩選
    (2009) 史哲維; Che-Wei Shih
    摘要 目前已知道有十種遺傳性神經退化疾病為多麩醯胺 (polygluta- mine, poly-Q)相關的疾病，其中第十七型脊髓小腦萎縮症 (SCA 17)，起因於染色體6q27位置上的TBP基因之轉譯區中，發生CAG三核苷酸重複擴增所導致。因此SCA17的可能分子致病機制為：突變的TBP蛋白質上具有延長的poly-Q片段，導致蛋白質結構錯誤摺疊及聚集，最後形成不溶性的包涵體，因而造成細胞死亡。已知在活體 (in vivo)和試管內 (in vitro)實驗中也可以發現，抑制錯誤延長性poly-Q片段的蛋白聚集，可以抑制poly-Q相關疾病的產生。本研究建立TBP-Lac Zα 融合蛋白於大腸桿菌中的表達系統，藉由β半乳糖苷酶之α互補作用，建構出微生物快速藥物篩選系統，以期加速相關藥物的開發。質體建構方面，是以pGEX 質體為基礎建構數種蛋白表達質體，包括帶有不同延長poly-Q的pGEX-TBP-lac Zα以及pGEX-Lac Zα重組質體。蛋白表達方面，將相關質體轉型至數種大腸桿菌 (E. coli)，以藍白篩選的方式，找出合適的菌種與表達條件，用以表達可溶性的短延長TBP蛋白 (培養液呈藍色)、及不可溶性長延長TBP蛋白 (培養液呈白色)。利用表現型分析、基因型分析、蛋白質電泳、西方轉漬分析以及β半乳糖苷酶活性分析，確立藥物篩選系統的可行性並驗證之。結果發現JM109大腸桿菌表達系統符合篩藥條件 (即pGEX-Lac Zα呈藍色、pGEX-fTBP40Q-Lac Zα呈白色)，故pGEX-fTBP40Q-Lac Zα/JM109可以作為篩藥模式。藥物篩選方面，目前以具有潛力之藥物 (例如海藻糖與剛果紅)做測試，結果發現這兩種藥物似乎無法抑制不可溶性長延長TBP蛋白凝集。本篇論文提供一種可以大量快速進行SCA17藥物篩檢的微生物模式，新穎的合成藥物仍在持續篩檢中，以找出有效抑制不可溶性長延長TBP蛋白凝集之藥物以供細胞及動物模式做進一步的藥物測試。