Browsing by Author "吳春嫺"

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Parkin 基因內含子9 g>a 多型性的功能性分析
(國立臺灣師範大學生命科學學系, 2010-12-??) 張菀玲; 吳春嫺; 王慈蔚; 李桂楨; Wan-Ling Zhang; Chun-Hsien Wu; Tsu-Wei Wang; Guey-Jen Lee-Chen
帕金森氏症(Parkinson’s disease，簡稱PD)為中腦黑質細胞退化導致多巴胺分泌不足所引發的漸進性神經性退化疾病。現今研究尚無法明確指出PD 的病理機制，只知PD 與環境及多種遺傳因子相關。先前本實驗室對台灣部分發病年齡低於50 歲的PD 病患進行Parkin 基因突變篩檢，發現一新穎的內含子9 插入突變c.1084intron+，此插入突變與內含子9 的-6g>a 的多型性點相關。進一步PD 病例-對照組分析結果顯示-6a 等位基因顯著和高PD 感受性相關(Wu et al., 2010)。本研究選殖Parkin 全長cDNA，並於末端in-frame 接上綠螢光蛋白後，再於表現子9、10 間依序插入包含內含子9 裁接donor 序列、-6g>a 多型性序列及內含子9 裁接acceptor 序列。將此Parkin cDNA 裁接質體轉染入人類腦癌細胞SK-N-SH 後，利用西方轉漬及活細胞影像儀，分析Parkin-綠螢光融合蛋白的表現量。結果顯示帶有-6a 多型性的內含子9 裁接質體，裁接效率低於帶有-6g 的內含子9 裁接質體。故推論內含子9 的-6g>a 多型性可能因提高c.1084intron+插入突變發生的機率，而與PD的感受性相關。本研究結果或能提供臨床診斷諮詢的參考。
Parkin 基因內含子9 g>a 多型性的功能性分析
(國立臺灣師範大學生命科學學系, 2010-12-??) 張菀玲; 吳春嫺; 王慈蔚; 李桂楨; Wan-Ling Zhang; Chun-Hsien Wu; Tsu-Wei Wang; Guey-Jen Lee-Chen
帕金森氏症(Parkinson’s disease，簡稱PD)為中腦黑質細胞退化導致多巴胺分泌不足所引發的漸進性神經性退化疾病。現今研究尚無法明確指出PD 的病理機制，只知PD 與環境及多種遺傳因子相關。先前本實驗室對台灣部分發病年齡低於50 歲的PD 病患進行Parkin 基因突變篩檢，發現一新穎的內含子9 插入突變c.1084intron+，此插入突變與內含子9 的-6g>a 的多型性點相關。進一步PD 病例-對照組分析結果顯示-6a 等位基因顯著和高PD 感受性相關(Wu et al., 2010)。本研究選殖Parkin 全長cDNA，並於末端in-frame 接上綠螢光蛋白後，再於表現子9、10 間依序插入包含內含子9 裁接donor 序列、-6g>a 多型性序列及內含子9 裁接acceptor 序列。將此Parkin cDNA 裁接質體轉染入人類腦癌細胞SK-N-SH 後，利用西方轉漬及活細胞影像儀，分析Parkin-綠螢光融合蛋白的表現量。結果顯示帶有-6a 多型性的內含子9 裁接質體，裁接效率低於帶有-6g 的內含子9 裁接質體。故推論內含子9 的-6g>a 多型性可能因提高c.1084intron+插入突變發生的機率，而與PD的感受性相關。本研究結果或能提供臨床診斷諮詢的參考。
Parkin 基因內含子9 g>a 多型性的功能性分析
(國立臺灣師範大學生命科學學系, 2010-12-??) 張菀玲; 吳春嫺; 王慈蔚; 李桂楨; Wan-Ling Zhang; Chun-Hsien Wu; Tsu-Wei Wang; Guey-Jen Lee-Chen
帕金森氏症(Parkinson’s disease，簡稱PD)為中腦黑質細胞退化導致多巴胺分泌不足所引發的漸進性神經性退化疾病。現今研究尚無法明確指出PD 的病理機制，只知PD 與環境及多種遺傳因子相關。先前本實驗室對台灣部分發病年齡低於50 歲的PD 病患進行Parkin 基因突變篩檢，發現一新穎的內含子9 插入突變c.1084intron+，此插入突變與內含子9 的-6g>a 的多型性點相關。進一步PD 病例-對照組分析結果顯示-6a 等位基因顯著和高PD 感受性相關(Wu et al., 2010)。本研究選殖Parkin 全長cDNA，並於末端in-frame 接上綠螢光蛋白後，再於表現子9、10 間依序插入包含內含子9 裁接donor 序列、-6g>a 多型性序列及內含子9 裁接acceptor 序列。將此Parkin cDNA 裁接質體轉染入人類腦癌細胞SK-N-SH 後，利用西方轉漬及活細胞影像儀，分析Parkin-綠螢光融合蛋白的表現量。結果顯示帶有-6a 多型性的內含子9 裁接質體，裁接效率低於帶有-6g 的內含子9 裁接質體。故推論內含子9 的-6g>a 多型性可能因提高c.1084intron+插入突變發生的機率，而與PD的感受性相關。本研究結果或能提供臨床診斷諮詢的參考。
台灣族群帕金森氏症Parkin及HTRA2基因變異的分子遺傳及功能研究
(2009) 吳春嫺; Chun-Hsien Wu
PARK2與PARK13分別與體染色體隱性遺傳及偶發性帕金森氏症(Parkinson's disease；簡稱PD)相關。PARK2基因產物Parkin具ubiquitin E3 ligase功能，而PARK13基因產物HTRA2則與細胞凋亡相關。本研究延續先前的PARK2 cDNA定序(管, 2007)，分析台灣帕金森氏症患者Parkin的基因變異。結果共發現二個缺失突變(Ex2-3del、Ex5del)、一個點突變(R334C)、兩個多型性(S167N、V380L)及一個新穎的內含子9插入突變(c.1084intron+)，此插入突變與內含子9上的-6g>a (IVS9 g>a)的多型性點相關。進一步對所蒐集的病人與性別、年齡相當的正常人進行S167N、V380L的病例-對照組分析，結果顯示V380L C等位基因頻率在病人族群中明顯較正常人族群低，且和低帕金森氏症感受性相關。Ex5del缺失突變與正常人淋巴細胞的分析結果顯示，病人淋巴細胞的Caspase-3活性顯著高於正常人，粒線體膜電位分析結果亦顯示病人淋巴細胞的細胞凋亡顯著高於正常人，在staurosporine或去血清處理下，病人淋巴細胞存活率顯著低於正常人。在HTRA2基因分析方面，HTRA2 cDNA定序結果發現二個新穎的點突變(R36W與T215M)。進一步建構EGFP標記的cDNA質體，表現於HEK-293T及SK-N-SH細胞，次細胞分層、西方轉漬、螢光顯微鏡分析結果顯示，R36W與T215M蛋白皆有成熟型蛋白生成且座落於粒線體，但R36W蛋白成熟型表現量較野生型低，T215M蛋白則表現異常分子量的前軀及成熟蛋白。