Browsing by Author "林郁樺"

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    使用液相層析串聯式質譜尋找醣基轉移酶GALNT14的新穎受質之醣蛋白體學研究
    (2017) 林郁樺; Lin, Yu-Hua
    多肽氨端乙酰基半乳糖轉移酶14 (GALNT14)的基因型近幾年來被發現與許多癌症腫瘤的發生和其對治療後的反應相關。這些癌症種類包括肝癌、膽管癌、大腸癌、食道癌、神經母細胞瘤和乳癌。特別是從台灣900多例病患中發現GALNT14的基因型可作為預測肝癌化療療效反應的標記。然而，除了在癌細胞外緣負責傳遞凋亡訊號的死亡受體 (DR) 5外，我們並不清楚GALNT14的其他受質。於是，本研究的目標為，從醣蛋白體學的層面，透過凝集素親和性管柱再搭配高效能液相層析串聯式質譜儀 (HPLC-MS/MS) 來尋找出可能為GALNT14受質的醣基化蛋白質。首先，將GALNT14嵌入Huh7、J7和Mahlavu這三株人類肝癌細胞株內，使其穩定表達GALNT14，另外還有三株一樣的人類肝癌細胞株，但是並無嵌入GALNT14，作為對照組。接下來通過自製的凝集素親和性管柱純化出特定的醣基化蛋白質，其中凝集素是選用花生凝集素(PNA)與碗豆凝集素 (VVA)。使用胰蛋白酶將純化出的醣基化蛋白水解成生肽後進入高效能液相層析質譜儀分析。在結果中，扣除掉對照組重複鑑定到的蛋白質，三個細胞株搭配兩種凝集素，一共鑑定出305種醣基化蛋白質。我們發現這些醣基化蛋白質與核醣體這條路徑極為相關，其中許多蛋白質也清楚地顯示出與肝癌的相關性。因此本篇研究成功的進一步了解GALNT14與癌症的關聯，對未來要了解詳細致癌機制開啟了一個新視野。