Browsing by Author "王作仁"

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第一型黏多醋儲積症
(國立臺灣師範大學生命科學學系, 1995-10-??) 李桂柱; 程幼青; 賴秋雁; 劉美能; 胡務亮; 王作仁
本實驗在以分予生物的技術，進行第一型黏多酪儲積症(MPS I) 的基因突變及多型性分扣1 0 -il 先由正常人及患者的皮成纖維母細胞萃取t!~ poly(At RNA作為模板，用特殊序列的寡核甘眉之苦l 子及鼠類白血病毒(Mo-MLV)反轉錄酵素，合成和mRNA序列互補的第一鏈eDNA ，再用聚合酵素鏈反應(PC R) 將α-Liduronidase(IDUA)基因，以部份重疊的二片段選殖出來O 產入pGEM-T載體役，將篩退出的純系(clone) 進行DNA序列分析，手告比較正常人及患者的基因序列，來了解患者的分子病13J 0 志有W3 為其型合j'‘在1'+偽基因1 上，轉錄起始密碼ATG之G 突變為A ，而且第2 表現子的47個胺基酸片段，發生在l斗-解諸侯構的缺失。南方吸潰分析顯示患者拉因體DNA上，一個包含第二表此子的4.7 Kb 片段發生了缺失;在Jj-偽在~ Ii;] 2上，第193 個月安基放呈現多型性的變化，由妥胺酸(Met)轉變為異白fl安酸(Ile) ，而且第8 表現， of 也，~'， i/] 19 ii吐絨毛眉立片段，也發生在同一解讀架構的缺失。南方吸j責分析則顯示患者的IDUA 基因，三it 無相對港的缺失。相反的，患者W2 的IDUA eDNA ，貝I) 含有數種改變胺基酸的突變和多型性的變化，包Jli P;j 型合予的RI05Q A3 61T T364M V的41和異型今子的H240L F49 多L G549E 0 北方吸潰分析顯示，志者的纖維母細胞中，可偵測至I) 少量的2.3 Kb 及2.0 Kb mRNA 及大量的6 .4 Kb和3.9 Kb processed pre-mRNA 0 If!!.)訂peR ;，主限制片段長度多型性(RFLP) 或不同數目童提單位(VNτ'R.)的方法，我們對正常人及第一型黏多蹄f伊拉希拉忠衍，進行均-m I 及VNTR 多型性的封偽基因(allele)及草套型(haplotype)頻率的分析。此多型性的研究，或-'J 11/~ 的， J~LMPS 1檢視的參考。
臺灣一位Hurler型黏多醣儲積症(MPS IH)患者的IDUA基因突變分析及記述
(國立臺灣師範大學研究發展處, 2000-04-??) 鄧燕妮; 李桂楨; 王作仁; 胡務亮; Yen-Ni Teng, Guey-Jen Lee-Chen, Tso-Ren Wang ,and Tuh-Liang Hwu
研究的目的在檢視臺灣一位Hurler型黏多醣儲積症(MPS IH)患者的α-L-iduronidase(IDUA)基因突變。首先利用和IDUA基因序列互補的寡核甘酸引子及聚合鋂鏈反應(PCR)，放大包含此基因各表現子片段；經洋菜膠體電泳檢查後，進行單股核酸構形多型性(SSCP)分析，以初步篩檢突變。再進一步將異常大小或構形的表現子片段選殖定序，以檢測患者的基因突變。結果發現患者為表現子9的異型合子突變，其對偶基因1上第1447-1473 cDNA序列發生缺失(1447del27)，造成9個胺基酸的缺失及第453個胺基酸由絲胺酸(Ser)轉變為精胺酸(Arg)；對偶基因2上的第1474個cDNA序列則發生15個核甘酸的插入(1474insl5)，造成5個胺基酸的插入。進一步構築僅含上述突變點的IDUA cDNA 重組質體，並經lipofection的方式轉移入COS-7細胞中表現後，含1447del27、1474insl5變異的IDUA重組質體轉移細胞所表現的酵素活性僅為野生型之0.1%、0.3%。北方吸漬(northern blot)分析顯示，含1447del27、1474ins15變異的重組質體轉移細胞所表現的IDUAmRNA量，分別為野生型之24%、49%。西方吸漬(western blot)分析顯示，重組質體轉移細胞所表現的突變的IDUA蛋白質，在IDUA多株抗體偵測的底限之下。本實驗結果顯示，此病人在表現子9的缺失及插入突變，影響IDUA酵素活性，造成患者臨床上嚴重的性狀。
臺灣一位Hurler型黏多醣儲積症(MPS IH)患者的IDUA基因突變分析及記述
(國立臺灣師範大學研究發展處, 2000-04-??-) 鄧燕妮; 李桂楨; 王作仁; 胡務亮; Yen-Ni Teng, Guey-Jen Lee-Chen, Tso-Ren Wang ,and Tuh-Liang Hwu
研究的目的在檢視臺灣一位Hurler型黏多醣儲積症(MPS IH)患者的α-L-iduronidase(IDUA)基因突變。首先利用和IDUA基因序列互補的寡核甘酸引子及聚合鋂鏈反應(PCR)，放大包含此基因各表現子片段；經洋菜膠體電泳檢查後，進行單股核酸構形多型性(SSCP)分析，以初步篩檢突變。再進一步將異常大小或構形的表現子片段選殖定序，以檢測患者的基因突變。結果發現患者為表現子9的異型合子突變，其對偶基因1上第1447-1473 cDNA序列發生缺失(1447del27)，造成9個胺基酸的缺失及第453個胺基酸由絲胺酸(Ser)轉變為精胺酸(Arg)；對偶基因2上的第1474個cDNA序列則發生15個核甘酸的插入(1474insl5)，造成5個胺基酸的插入。進一步構築僅含上述突變點的IDUA cDNA 重組質體，並經lipofection的方式轉移入COS-7細胞中表現後，含1447del27、1474insl5變異的IDUA重組質體轉移細胞所表現的酵素活性僅為野生型之0.1%、0.3%。北方吸漬(northern blot)分析顯示，含1447del27、1474ins15變異的重組質體轉移細胞所表現的IDUAmRNA量，分別為野生型之24%、49%。西方吸漬(western blot)分析顯示，重組質體轉移細胞所表現的突變的IDUA蛋白質，在IDUA多株抗體偵測的底限之下。本實驗結果顯示，此病人在表現子9的缺失及插入突變，影響IDUA酵素活性，造成患者臨床上嚴重的性狀。