Browsing by Author "鄧安祐"

Filter results by typing the first few letters
Now showing 1 - 1 of 1
  • No Thumbnail Available
    Item
    基因表現對細菌基因位點的動態行為及相鄰核醣核酸聚合酶空間分布的影響
    (2020) 鄧安祐; Teng, An-Yu
    染色體的組織和基因表現之間存在著一定的關聯性，然而，對於原核細胞來說，基因表現具體是如何影響染色體組織，依舊是一個需要進行更多實驗驗證與討論的問題。其中，轉錄作用對染色體的組織更是扮演了一個相當重要的角色。轉錄工廠(transcription factories)便是在探討轉錄作用與染色體組織的課題之一。轉錄工廠的現象是指旺盛的轉錄行為可能會發生在細胞內部幾個離散的區域當中，RNA聚合酶(RNA polymerase)和其他的轉錄因子(transcription factors)，以及被旺盛表達的基因會一同聚集在「工廠」，藉此達到最高的轉錄效率。然而在原核細胞當中我們無法以現有的螢光顯微術，直接觀察到這麼微小的結構。只能以各種旁敲側擊的實驗來印證轉錄工廠的存在。而從前人的驗證實驗當中，卻也一直都缺乏同時記錄基因與RNA聚合酶的位置資訊。 　　為此在本次實驗中，會以TetR-YFP/tetO的螢光抑制操作系統標定目標基因，並用單分子定位顯微(single-molecule localization microscopy)觀察由PAmCherry標定的RNA聚合酶，藉此同時得到基因位點與RNA聚合酶在細胞中的位置。之後再進一步分析RNA聚合酶的群聚行為，並探討基因表現旺盛與否，基因位點周圍RNA聚合酶的群聚現象。也藉由TetR-YFP/tetO和LacI-mScarlet/lacO標定目標基因的上下游，觀察基因表現對於染色體運動行為產生的影響。 　　而從結果可以看出，RNA聚合酶的分布，相較於基因表現的旺盛程度，可能更容易受到染色體的結構而影響。從軌跡追蹤實驗中，發現基因的表現的確會對基因位點的運動造成差異，然而這些差異似乎還是主要源自於類核自身的結構，這個結果與前一部分的實驗結果相互印證。而我們從擬合出軌跡互相關函數得到的DNA表觀尺寸也可以初步知道，致使基因位點關聯性下降的原因，有可能是因為染色體的聚集，使DNA產生糾纏，因此增加了傳遞的困難。