Browsing by Author "黃淑宜"

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    Analysis of KLK1 Gene-130Gn Polymorphism with the Risk of Parkinson's Disease
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2005-06-??) 黃淑宜; 莊蕙瑄; 陳瓊美; 吳逸如; 李桂楨
    帕金森氏症為一常見的神經退化性疾病，和遺傳及環境因素相關。KLK1為一serine protease，在人體包括大腦皮質、海馬迴等多處部位皆有表現。本研究的目的在探討KLK1基因啟動子-130G(下標 N)多型性與國人帕金森氏症感受性的相關性。-130G(下標 N)多型性基因型的分析方法包括螢光PCR產物的長度分析、單股核酸構形多型性／異雙股分析及DNA定序等。所研究樣品群包括208位帕金森氏症患者及95位正常人。結果共觀察到五種對偶基因：I (G9)、A (G10)、B (G2CG7)、H (G11)、K (Gl2)。多型性對偶基因的啟動子轉錄活性分析顯示，在人類胚胎腎細胞HEK-293及人類腦癌細胞IMR-32中，A、B、H對偶基因的轉錄活性並無顯著差異，但三者的轉錄活性均較K對偶基因顯著的好。進一步的依據含或不含K對偶基因的基因型，或K對偶基因頻率，進行X^2統計分析，結果顯示在正常人族群與帕金森氏症患者群間，並未呈現顯著差異。故推論KLK1基因啟動子多型性，雖然會影響其在人類胚胎腎細胞及腦癌細胞中的表現量，但其變異和國人帕金森氏症的感受性並沒有太大關連性。
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    人類遺傳疾病 第一部份：第八型脊髓小腦共濟失調症之分子遺傳及外遺傳研究 第二部份：台灣兩個Netherton徵候群病患家族之分子遺傳研究
    (2006) 黃淑宜; Shu-Yi Huang
    第一部份： 第八型脊髓小腦共濟失調症(SCA8)為退化性神經疾病，其特徵為小腦功能異常或亦包含其他部位的神經性異常，此疾病和染色體13q21位置的SCA8基因3'端CTG三核重複擴增相關。自1999年以來，SCA8基因的CTG擴增突變見於遺傳性及偶發性的運動失調患者，及帕金森氏症(PD)、阿茲海默氏症(AD)、Friedreich's運動失調症等退化性神經疾病及精神病患，甚至於極少數正常人。SCA8基因表現於腦的各部位，但轉錄的RNA裁接後並不具open reading frame。在人類及老鼠基因體中，SCA8基因的5'端皆和緊鄰的KLHL1基因(actin結合蛋白)的5'端互補，即SCA8轉錄物和KLHL1轉錄物互為antisense RNA，故SCA8基因可能藉此antisense RNA，來調節KLHL1基因的表現。先前本實驗室對SCA8致病基因進行遺傳分析，亦在台灣人的PD患者中發現的CTG重複擴增的現象(Wu et al., 2004)。本研究利用PCR-genotyping及DNA定序技術，擴大分析正常人族群、運動失調症患者、PD患者、AD患者及其他神經疾病族群SCA8基因CTG重複變異，結果共發現8位個體具CTG重複擴增的對偶基因，包括1位正常人、2位運動失調症患者、1位肌張力異常症患者、1位泛發性路易體患者及3位PD患者。RT-PCR分析正常人和CTG重複擴增病患的淋巴細胞株，發現SCA8基因和KLHL1基因皆有表現。進一步利用甲基化專一的PCR檢測及限制酵素的甲基化檢測，分析SCA8基因和KLHL1基因重疊序列上的CpG島的甲基化情形，發現在正常人和SCA8基因CTG重複擴增患者細胞中，均有不同程度的甲基化情形，但和SCA8基因CTG重複並無絕對相關性。在氧化壓力相關研究中，經由氧化劑t-butylhydroperoxide (TBH) 處理後，正常人及SCA8基因CTG重複擴增患者淋巴細胞株的WST-1細胞增生檢測、Trypan blue排除檢測、Superoxide dismutase assay結果，皆無明顯差異，故推論SCA8基因CTG重複擴增，並未影響細胞株的抗氧化能力。 第二部分： Netherton Syndrome (NS)是一種嚴重的體染色體隱性遺傳皮膚疾病，特色是先天性的紅皮症(congenital erythroderma)、特殊不正常的髮根結構(bamboo hair)及伴隨著體內IgE濃度提高的過敏性表現(atopic manifestations)。NS的病因是由於體內缺少絲胺酸蛋白抑制因子(serine protease inhibitor)的活性，而造成體內絲胺酸蛋白(serine protease)的活性異常提高。到目前為止，NS還沒有非常好的治療方法。NS的致病基因在2000年時被發現，位於染色體5q31-32的SPINK5 (serine protease inhibitor Kazal-type 5)基因，大小為61 kb，含有33個外顯子，其產物LEKTI蛋白，是一種絲胺酸蛋白抑制因子，廣泛的表現在人體各組織中，含有1064個胺基酸，有十五個potential inhibitory Kazal-type domains (D1–D15)，包括典型的Kazal-type domain D2和D15。和NS相關的SPINK5基因突變類型主要是產生了前成熟終止密碼(premature termination codon)，造成mRNA的不穩定，而使產物蛋白LEKTI (lympho-epithelial Kazal-type related inhibitor)的生成遽減。本研究目的為探討台灣兩個NS病患家族之分子致因。藉著PCR、定序來檢視兩位患者包括啟動子在內的SPINK5基因，找出和患者性狀相關的基因突變，並利用鄰近之6個微衛星序列及SPINK5基因上的5個SNP，對患者270家族進行連鎖分析。結果在患者2567的外顯子25上找到兩個突變點：已報導過的R790X及新發現的T808I，分別遺傳自患者的父親及母親。另一患者270為一新發現的R267Q變異的同型合子，此變異的Q對偶基因在正常人族群中約佔31%，但患者父親並未帶有此變異。進一步利用同步定量PCR (real-time PCR)，來檢測患者270是否有缺失突變(deletion)，結果顯示患者270在外顯子10的DNA套數和其啟動子鄰近序列(CA)20及D5S2013(為異型合子)相同，即排除其發生缺失突變的可能性。對於患者270在不符合遺傳定律之R267Q位點，推論可能發生基因轉換(gene conversion)。