Browsing by Author "Chih-Chien Hsieh"

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    利用奈米鑽石濃縮萃取技術結合基質輔助雷射脫附游離飛行時間質譜儀定量分析葡萄糖胺聚醣之寡糖衍生物
    (2012) 謝芝茜; Chih-Chien Hsieh
    分析的葡萄糖胺聚醣 (glycosaminoglycans，GAGs)是做為診斷黏多醣症 (mucopolysaccharidosis disease，MPS)及判斷治療效果的重要依據。本篇利用微波加熱輔助進行GAGs降解，搭配聚精胺酸奈米鑽石探針進行純化再結合基質輔助雷射脫附游離飛行時間質譜儀(MALDI-TOF MS)達到可高通量、定性、定量分析小體積生物樣品中的硫酸化GAGs。利用微波加熱進行GAGs甲基化(Methanolysis)降解,例如硫酸軟骨素多醣 (chondroitin sulfate, CS)甲基化降解，能有效的將反應時間由75分鐘縮短到7分鐘。而利用本實驗室之前所發展出覆蓋著聚精胺酸的奈米鑽石探針，可藉由聚精氨酸與硫酸化多醣之間的高專一性結合特性，使其能夠在高稀釋溶液、尿液中專一性的萃取出CS，達到快速純化進入MALDI MS分析。我們藉由配置同位素甲基化試劑來降解CS做為內標準品，成功的克服了MALDI因雷射功率及非勻相結晶所導致訊號的低再現性，定量曲線的線性範圍從50-2.5 ng，並且具有好的線性(R2 = 0.999)。本篇所使用的基質NEDC其基質訊號干擾小，適合用來分析降解後CS，且高耐鹽，因此分析在複雜且含有高鹽類環境中(ex.尿液、腦脊髓液)之CS，可不需經由去鹽的步驟就可直接進入MALDI進行分析。綜合以上，我們成功的發展出快速(30 分鐘內)且靈敏(LOD =75 pg)用來偵測複雜環境中GAGs的方法，可有效的運用在診斷MPS及監控治療效果上。