Browsing by Author "Liao, Wan-Rou"

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    以氰丙基液相層析質譜技術精進目標代謝體學與途徑解析
    (2025) 廖琬柔; Liao, Wan-Rou
    代謝體學探討生物體內小分子代謝物的組成，透過高效能液相層析串聯式質譜儀定性與定量分析，獲取全面性的代謝途徑變化，有助於疾病早期診斷及發現有效治療策略。本研究開發並應用氰丙基層析法，透過調整環境pH值，使目標物在5分鐘內達到良好分離，並成功建立生物分子分析平台。該平台探索了51種代謝物，涵蓋廣泛的生物途徑，包括核苷和核苷酸、氧化還原代謝體、糖解途徑、戊糖磷酸途徑、嘌呤合成途徑、氨基酸以及與神經疾病相關之代謝物。此外，透過在移動相中添加檸檬酸來防止分析物吸附在金屬表面，從而改善波峰形狀並提高靈敏度。質譜系統採用正負模式電噴灑游離法與多重反應監測模式。生物分析平台良好的精密度（RSD%< 15.1%）與準確度（回收率 81.3 - 117.8%），線性範圍1.0 - 2000 ng mL⁻¹，相關係數r > 0.99，偵測極限0.1至10 ng mL⁻¹，定量極限0.1至25 ng mL⁻¹。該平台應用於細胞、腦組織、血液與蜂王漿等檢體，以評估基質效應並驗證平台的可靠性。接著應用於dSH-SY5Y細胞之代謝分析，顯示在神經毒素6-OHDA的環境下，導致細胞內粒線體損傷，進而引起細胞內氧化壓力增加以及能量ATP減少，驗證其可行性與可靠性。接著進一步探討ENERGI在SH-SY5Y細胞與小鼠腦中的神經保護效果，展現其在疾病研究中的潛在應用。該生物分子分析平台具快速、高效且符合綠色化學原則，適用於食品、細胞、組織及生物流體的代謝物分析，成為解析生物體內代謝途徑的強大工具。
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    以液相層析串聯式質譜技術檢測蜂王乳中的單、雙、三磷酸腺苷化合物
    (2018) 廖琬柔; Liao, Wan-Rou
    核苷酸化合物由含氮鹼基、核糖和磷酸基團所組成，以腺嘌呤(Adenine, Ade)所組成的三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate, ATP)、二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate, ADP)、單磷酸腺苷(Adenosine monophosphate, AMP)，在生理機能中扮演重要的角色。蜂王乳(Royal Jelly)為蜂巢中工蜂上顎腺(Mandibular gland)以及咽下腺(Hypopharyngeal gland)的分泌物，富含多種純天然成分，更有研究指出蜂王乳可提供人體所需之營養。本實驗以此為出發點，開發一種可靠且準確的方法，檢測蜂王乳中的核苷酸含量，並探討二日齡和三日齡蜂王乳的含量差異。由於蜂王乳為複雜的基質樣品，為了準確定量蜂王乳中的Ade、AMP、ADP和ATP含量，本實驗開發快速且有效的固相萃取法(Solid-Phase Extraction, SPE)以及分散式固相萃取法(Dispersive Solid-Phase Extraction, dSPE)兩種前處理方法，並優化參數以達到最佳的萃取效率。本實驗的分析方法，使用cyanopropryl (-CN)管柱搭配四元流動幫浦，藉由改變層析環境之pH值，使分析物在12分鐘內達到良好的分離，再結合串聯式質譜進行檢測。本實驗所開發的分析方法有良好的精確度(RSD%< 10.5%)與準確度(回收率81.3 - 118.4%)，線性範圍在2.5 - 1000 ng/mL之間，相關係數皆在r = 0.9995以上，偵測極限(LOD)和定量極限(LOQ)最低分別可達1.0 ng / mL和2.5 ng / mL。應用分散式固相萃取法搭配液相層析串聯式質譜法，成功定量蜂王乳中的核苷酸含量(6.2 - 2126.0 mg/kg)，二日齡與三日齡蜂王乳的核苷酸含量並無顯著差異。