Browsing by Author "Lin, Ping-Heng"

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    以邏輯閘建構全細胞生物感測器檢測銅離子
    (2023) 林秉衡; Lin, Ping-Heng
    全細胞生物感測器是利用細菌作為感測器主體，透過基因工程技術，藉由賦予它不同調控基因組，使之具有檢測特定待測物的能力，其具有操作方便、價格低廉，對環境污染低等優點，使全細胞生物感測器越來越蓬勃發展。本論文是利用耐金屬貪銅菌 (Cupriavidus metallidurans, C. metallidurans) 作為宿主細菌，並且融入邏輯閘中的AND gate概念設計質體，希望利用兩個啟動子PCopA (Cu2+、Zn2+、Cd2+) 與PCopZ (Cu2+、Au3+、Ag+) 之間的交集，提高對銅離子的專一性，並且使用了Spy Tag/Catcher黏合標籤，提高重組sfCherry3C(1-10)、sfCherry3C(11)的效率以及重組T7 RNA聚合酶 (拆成C-T7和N-T7兩片段) 並作為訊號放大器，提高檢測銅離子的表現。在以上兩個系統，皆已成功建構出對銅離子專一的菌株，在兩系統中: sfCherry3C (2.5-250 μM) 、T7 RNAP (0.1-5 μM) 都有良好的線性，以及低偵測極限，但目前對於背景值以及檢測倍率的方面還需做進一步的優化。結論來說，我成功了開發了一個對銅離子專一的全細胞生物感測器，雖然目前的檢測表現還有進步空間，但可以利用此兩系統作為基礎，優化並發展出更完善的檢測器。