Browsing by Author "Ta-fang Lin"

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    水稻RNase基因的選殖
    (2004) 林大方; Ta-fang Lin
    產生RNase是植物對抗缺磷逆境的一種方式。已知TN5-9水稻懸浮培養細胞，在缺磷培養下，可誘導產生一17kDa之RNase。為了解是否在缺磷培養下，僅產生一種RNase？而被誘導產生之RNase其基因表現特性為何？本研究中採用分生方法，以subtractive cDNA PCR、RT-PCR方式選殖出缺磷處理下，水稻被誘導表現之RNase基因。在16個轉型株中，並沒有發現T2/S family RNase基因，但找到有一可能具有RNase活性之pathogenesis-related protein 10a (PR-10a)基因。之後以北方轉漬法及RT-PCR方式，可以驗證水稻在缺磷狀況下，會誘導PR-10a基因大量表現。為確認PR-10a是否具有RNase活性，將此一基因重組後，轉型至大腸桿菌E. coli BL21 (DE3)，進行重組蛋白的表現。純化所得之重組蛋白，在Nus tag片段切除後，可分離得到17kDa之PR-10a蛋白質。進行RNase活性檢測，發現唯有重組蛋白之native form不具有RNase活性。將重組蛋白以β-ME、DTT、EDTA、CIAP處理後，發現CIAP處理之重組蛋白可表現出RNase活性，可分解rRNA及tRNA。