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    台灣族群帕金森氏症Leucine-Rich Repeat Kinase 2 (LRRK2) 基因變異的分子功能研究
    (2011) 張文騰; Wen-Teng Chang
    PARK8基因座的LRRK2 (全名leucine-rich repeat kinase 2)基因，其突變會導致體染色體顯性的帕金森氏症。LRRK2蛋白具有多個功能區域，於神經系統、大部份器官及淋巴細胞等都有表現。新穎的R767H、S885N變異及已報導過的R1441H變異，是本實驗室在臺灣帕金森氏症患者發現的突變點，R1628P和G2385R兩變異則是華人帕金森氏症的危險因子。本論文首先建構EGFP標記的野生型及R1441H、R1628P、G2385R變異的LRRK2質體(含S1647T、M2397T多型性)，送到HEK-293T細胞中表現，經共軛焦顯微鏡觀察、西方轉漬分析研究，顯示上述變異對LRRK2蛋白在細胞內的位置及合成皆無受到影響。其次選殖α-synuclein cDNA，與R767H、S885N、R1441H、G2019S (白種人常見，作為對照)突變的LRRK2質體共轉染入SK-N-SH細胞，經細胞免疫螢光染色及共軛焦顯微鏡觀察，顯示野生型LRRK2廣泛分佈在細胞質並與α-synuclein有些微連繫。突變的R767H、S885N、R1441H、G2019S亦主要分佈在細胞質，R1441H和G2019S的LRRK2容易形成不含α-synuclein且鄰近細胞核的聚集。進一步的表現上述LRRK2質體於HEK-293T細胞二至六天後，螢光顯微鏡觀察及定量統計結果顯示R1441H和G2019S較野生型的LRRK2顯著地容易誘導更多的包涵體。最後，選殖V5標記的ARHGEF7 cDNA，並建構不含S1647T、M2397T多型性的Myc-His標記的LRRK2質體，共轉染入HEK-293T細胞，進行免疫共沉澱與GTP結合能力試驗的分析，結果發現S885N、R1441H、G2019S等突變影響LRRK2蛋白與ARHGEF7的交互作用。