學位論文
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Item 利用質譜技術鑑定甲型流感病毒血球凝集素H7蛋白的雙硫鍵鍵結(2019) 葉沛柔; Yeh, Pei-Jou雙硫鍵為影響蛋白質功能與活性的關鍵結構因子，對於可作為疫苗的重組抗原蛋白來說，雙硫鍵會影響其摺疊以及結構，錯接的雙硫鍵會嚴重的影響抗原與抗體結合的特異性，因此蛋白質正確雙硫鍵鍵結的鑑定是極重要的。本篇研究中，我們利用雙甲基化反應搭配液相層析質譜技術以及RADAR軟體的輔助，鑑定甲型流感病毒H7N9病毒顆粒以及其重組的血球凝集素H7蛋白： H7蛋白三聚體、H7蛋白單體以及Dsbc-H7、Dsbc-HA1。蛋白質樣品利用不同的酵素組合在酸性環境下水解，在本研究中使用包含: 胰蛋白酶 (trypsin)、trypsin + chymotrypsin、trypsin + asp-n等組合。使用trypsin + asp-n的酵素組合可在全部的樣品中鑑定到四個雙硫鍵鍵結，此為鑑定H7蛋白最佳的酵素組合。雙硫鍵片段C272-C296可在H7N9樣品中被鑑定到，而雙硫鍵片段C4-C458則在H7-trimer中被鑑定到。此雙硫鍵分析方法可對於蛋白質活性提供重要的資訊，據我們所知，此篇為首次利用雙硫鍵分析的方法探討甲型流感病毒H7N9血球凝集素H7重組蛋白活性的研究。