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阿拉伯芥與馬拉巴栗葉肉細胞的葉綠素酶亞細胞定位
(2020) 林均威; Lin, Jun-Wei
葉綠素酶（clorophyllase, Chlase或CLH）是啟動葉綠素降解過程的主要酵素之一，能將葉綠素水解成脫植醇葉綠素（chlorophyllide）及植醇（phytol）。根據前人研究顯示，CLH位於柑橘的果皮色質體或銀杏葉和馬拉巴栗（Pachira aquatica）的葉綠體中；而在其他文獻指出，CLH不是位於葉綠體中，而在阿拉伯芥（Arabidopsis thaliana）中葉肉細胞的細胞質、液泡膜或內質網上。因此本研究將確定野生種阿拉伯芥及馬拉巴栗的CLH於不同發育時期中的表現模式。首先利用各種生物資訊資料庫分析比對馬拉巴栗葉綠素酶1（PaCLH1）與阿拉伯芥葉綠素酶（AtCLHs）的序列相似性及預測AtCLHs定位，結果顯示PaCLH1與AtCLHs有高序列相似性，而且預測CLHs是定位在細胞質和葉綠體。其次以Anti-PaCLH1抗體進行西方墨點法、免疫螢光染色和免疫金定位來分析兩物種CLH的亞細胞定位。西方墨點結果表明CLH蛋白表現量會隨著葉片的衰老程度而降低；在免疫細胞化學定位中，阿拉伯芥AtCLHs螢光訊號皆在葉綠體上；而CLH的免疫金標記定位在兩物種中的葉綠體、細胞質和液泡中，但不存在於線粒體和細胞壁上。