學位論文
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Item 第八型脊髓小腦運動失調症：ATXN8基因啟動子上多型性點之遺傳與功能性分析研究(2012) 楊修嘉; Siou-Jia Yang第八型脊髓小腦運動失調症(簡稱SCA8)是一種會導致小腦運動能力失調的體染色體顯性遺傳之神經退化性疾病，但是其外顯率並不完全。SCA8相關基因是在染色體13q21的位置，包含了ATXN8OS CUG重複擴增RNA及ATXN8多麩醯胺(polyQ)擴增的蛋白。先前本實驗室研究SCA8重複序列在台灣人族群中的分佈情形，結果發現在巴金森氏症族群中的等位基因的比例較正常人族群高(8/593=1.3%相較於3/659=0.2%)，雖然未達顯著性(Wu et al., 2009)。另外，我們在ATXN8的啟動子上發現一新穎的-62 G/A多型性，神經腫瘤細胞及胚胎腎細胞的螢光酵素報告檢測顯示，包含-62G等位基因的啟動子轉錄活性顯著高於-62A等位基因(Wu et al., 2009)。本論文探討-62 G/A多型性對帕金森氏症感受性與分子機轉。首先針對此多型性點進行帕金森氏症患者及性別、年齡相當的正常人族群的病例-對照組研究，結果發現AA基因型者有顯著低的疾病罹患風險。其次探究-62 G/A多型性對ATXN8基因的啟動子調控，cDNA過度表現及luciferase reporter檢測顯示在SK-N-SH細胞中，轉錄因子C/EBPA會增強ATXN8啟動子的活性，但CEBPA與ATXN8 -62G、-62A啟動子的結合檢測，並未看出顯著的差異。Item 建立和分析過量表現PPP2R2B 基因Bβ1之細胞與基因轉殖小鼠(2008) 高郁涵小腦脊髓萎縮症十二型 (Spinocerebellar ataxia 12, SCA12)是一種自體顯性遺傳疾病，目前在歐洲人和印地安人有病例發生。臨床徵兆有講話困難、小腦與周邊神經的病變、衰退，並伴隨著震顫的出現。SCA12是在基因PPP2R2B基因5’端CAG擴增所造成，也是目前在各型SCA疾病中所僅知功能基因5’端未轉錄部分擴增造成之結果，PPP2R2B基因會轉譯出一個專一表現在腦部的去磷酸PP2A (protein phosphotase 2A)的調控次單位Bβ。PP2A主要由三個次單元組成的Ser/Thr phosphatase，其組成次單元分別為A (結構次單元)、B (調控次單元)、C (催化單元)，而B次單元可以調控PP2A的生理角色進而調控很多細胞的功能，包含細胞週期的調控、tau的磷酸化和細胞自殺。CAG擴增的致病長度為55~78，而9~28是屬於正常範圍，而CAG的擴增被認為可能會影響到去磷酸酶的活性，進而改變蛋白質的磷酸化程度，使得細胞的正常功能失調。因此我們建立過量表現Bβ1的誘導細胞株和基因轉殖小鼠去測試這個假設。在動物模式中，我們已經得到異型核子與同型核子的基因轉殖小鼠並進行Rota-rod、locomotor和HomeCageScan之行為測試。總結，過量表現PPP2R2B基因引起基因轉殖小鼠的小腦病變包含了Purkinje cell 與神經細胞的缺少和神經膠化現象發生。其中也發現有情緒上的改變進而影響小鼠的行為表現之現象。為了測試過量表現Bβ1對細胞的影響，我們透過西方點墨法（western blot analysis）、細胞存活率測試（MTT assay）和細胞型態觀察來鑑定這些誘導細胞株。在加入氧化壓力藥物之後，轉入過量表現Bβ1的細胞株存活率明顯低於控制組，顯示細胞會因氧化壓力而導致凋亡。根據我們的研究顯示，過量表現Bβ1在我們的動物與細胞模式中，確實會造成神經細胞的毒性，而進一步導致神經凋亡。