學位論文
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Item 白藜蘆醇對MPTP誘導人類神經瘤SK-N-SH細胞死亡的保護效果(2007) 楊雅珺巴金森氏症是常見的漸進性神經退化性疾病，許多相關研究認為氧化壓力在造成巴金森氏症上，扮演極重要的角色。MPTP（1-methyl- 4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine）是一種選擇性破壞多巴胺神經細胞的神經毒素，目前被廣泛應用於建立巴金森氏症實驗動物模式。Resveratrol是一種存在於紅葡萄酒的植物性動情素，具有神經保護的效果。本實驗是採用MPTP細胞模式來探討MPTP對細胞傷害及處理resveratrol的保護效果。實驗材料是以retinoic acid誘導SK-N-SH神經瘤細胞分化之SK-N-SH神經細胞。實驗結果發現在10 mM MPTP 處理SK-N-SH細胞24小時只有70%的存活率；MPTP對SK-N-SH細胞的氧化性傷害並非呈現在提高細胞內的ROS量，細胞亦不會有提高HSP70量的反應。以40~50 nM resveratrol處理細胞3小時會顯著的降低細胞的存活率，低於30 nM resveratrol處理對細胞是沒有毒性的。如以10~30 nM resveratrol先處理細胞3小時再共同處理10 mM MPTP 24小時，則有使細胞的存活率提高約為對照組的1.08倍的效果。resveratrol 處理細胞27小時組比其對應的處理3小時組，細胞內ROS量都有下降的趨勢，以10~40 nM resveratrol先處理細胞3小時再共同處理10 mM MPTP 24小時，則細胞的ROS量均顯著的下降。以20nM resveratrol處理SK-N-SH細胞3小時或27小時，均會讓細胞HSP70量上升，經AG490（JAK抑制劑）處理證實細胞是藉由JAK/STAT pathway 的訊息傳遞路徑誘導HSP70產生。根據以上結果推測resveratrol先處理對細胞是一種壓力，低劑量時細胞HSP70增加，可以用以抵抗的MPTP的傷害，而細胞內HSP70的產生並不一定藉由細胞內ROS量升高引起的。高濃度40~50 nM resveratrol的處理，對細胞造成的壓力大，所以會顯著的傷害細胞存活、上升ROS量；如又同時與MPTP共同處理細胞就會加成的傷害細胞及增加ROS的產生量。本研究探討resveratrol對神經細胞保護效果的劑量及機制，祈能在人類巴金森氏症的預防及治療運用上能有所助益。Item 第八型脊髓小腦運動失調症之果蠅模式建立與致病機制研究(2005) 項聖文; Sheng-Weng Hsiang壹、中文摘要 脊髓小腦運動失調症（SCAs）為一群退化性神經疾病，其特徵為小腦功能異常，但也常伴隨中樞神經系統其他部位神經性異常，第八型脊髓小腦運動失調症（SCA8）與染色體13q21上的SCA8基因3’端非轉譯區CTG三核酸重複序列擴增相關。本研究嘗試建立SCA8 果蠅模式以供致病機制之研究，將CTG重複序列表現於果蠅複眼時，會造成感光細胞退化，顯見重複序列為致病的重要因子，以原位雜合顯示細胞含重複序列的核酸分子，會聚集於核內形成核酸聚點(RNA foci)；此外先前研究由基因序列分析顯示SCA8不含顯著的開放譯讀區(ORF) ，推論SCA8不會有蛋白質產生，然而以綠螢光蛋白基因接在SCA8尾端轉殖果蠅，發現綠螢光蛋白可因SCA8的轉錄而表現，顯示SCA8基因可能合成蛋白質產物；將SCA8含重複序列的ORF表現時，亦會造成感光細胞退化，且含重複序列核酸會於核內形成核酸聚點，無法輸送至細胞質轉譯成有毒的聚白胺基酸蛋白。由上我們得知重複序列在核酸階層即可造成細胞毒害，文獻指出含CUG重複序列可藉與muscle-blind及PKAAP等核酸結合蛋白形成核酸聚點，降低這類核酸結合蛋白的表現量，而增強CUG重複序列對細胞的毒害；將SCA8果蠅模式置於這些基因缺失的背景下，我們的確發現複眼性狀受到影響。此外我們也發現熱休克蛋白(Hsp70)可減緩果蠅模式的性狀，由此結果推論蛋白質不正常摺疊可能為SCA8致病機制之一。由於SCA8與KLHL1基因（actin結合蛋白）的5’端共用一段DNA序列，且均表現於腦部，我們也試圖了解KLHL1在SCA8的致病機制中是否扮演一定角色；單獨表現KLHL1蛋白於果蠅複眼並未造成明顯性狀，將SCA8重複序列與KLHL1共同表現於感光細胞，也未增加複眼之退化，初步認為KLHL1並非導致SCA8的主因。