生物學報
Permanent URI for this collectionhttp://rportal.lib.ntnu.edu.tw/handle/20.500.12235/148
Browse
3 results
Search Results
Item 水稻(Oryza Sativa L.) Osm30分泌性蛋白質的生化及功能分析--一種第三型的幾丁質酶(國立臺灣師範大學生命科學學系, 2006-06-??) 李嘉雯; 王玉麒本研究自水稻的懸浮細胞培養液中，分離出一分子量為30kDa，且具有水解glycol chitin活性之蛋白質(Osm30)。經由蛋白質N端胺基酸微定序分析及基因選殖的結果顯示，Osm30為水稻的第III型幾丁質酶家族的一員。將Osm30基因轉形並表現於大腸桿菌峙，可觀察到細菌生長被抑制的情形，推測Osm30可能具有溶菌酶的活性。在水稻細胞懸浮培養的過程中，Osm30的mRNA會因繼代培養而有暫時性增加表現的情形，但其在細胞內的蛋白質含量則相對穩定，而在培養液中，Osm30蛋白質則是隨著培養天數增加而持續累積，顯示Osm30蛋白質具有高度穩定性。當以四種 病原真菌，包括：Rhizoctonia solani、Sarocladium oryzae、Gibberella fujikuroi和Bipolaris oryzae，成染水稻細胞時，均會誘導增加Osm30的表現量，顯示Osm30可能在水稻的抗菌防禦機制中扮演相關角色。甲基茉莉酸(MeJA)、離層酸(ABA)和水楊酸(SA)為已知和植物防禦機制有關的生長調節劑，當以這些生長調節劑對水稻細胞進行處理時，MeJA與ABA可誘導Osm30的表現，但是SA的處理則不影響。sm30的表現。此外，我們也在Osm30基因的起動子區域發現與JA和ABA相關的轉錄調控位。根據上述資料，我們推測Osm30為一具有幾丁質酶和溶菌酶雙重酵素活性的蛋白質，在水稻細胞內平常只有基礎量的表現，但當病原菌入侵時，可能經由JA或/和ABA啟動的訊息傳遞途徑來激發Osm30的表現，以強化植物的防禦機制。Item The Spatial and Temporal Expression of Potato ci21A Promoter in Tomato and Arabidopsis(國立臺灣師範大學生命科學學系, 2009-06-??) 蘇倩儀; 王玉麒Item 水稻(Oryza Sativa L.) Osm34分泌性蛋白質的基因選殖及第三型幾丁質酶基因家族的親緣關係分析(國立臺灣師範大學生命科學學系, 2006-06-??) 李嘉雯; 王玉麒本研究從水稻細胞的培養液中，分離出一分子量為34kDa的分泌性蛋白質(Osm34)，經由N端胺基酸微定序分析及基因選殖的結果顯示：不包含分泌訊息序列的Osm34 cDNA長度為1045bp，可轉譯出含有282個胺基酸，等電點為4.94的蛋白質。Osm34的胺基酸序列中，除了具有醣苷水解酵素第18家族成員所特有的兩個保守序列「104RVAVSMGG111」和「146LDGIDIDYE154」之外，胺基酸序列一致度(identity)的比對結果也顯示該蛋白質為一個由我們最先鑑定的水稻第III型幾丁質酶，我們已將其序列註冊於GenBank，編號為AF330230。水稻基因組資料庫中，共登錄有32個具保守序列的第III型幾丁質酶。我們對這些幾丁質酶進行多序列比對與親緣關係分析，結果顯示這些幾丁質酶可被分類至IIIa和IIIb兩個亞型(subc1asses)。III a亞型共包含有29個蛋白質，其胺基酸序列的一致度介於34-85%之間；IIIb亞型雖僅含有3個蛋白質，但其胺基酸序列的一致度高達50-83%；不同亞型之間，胺基酸序列的一致度則低於25%。由前人的研究(Bokma et al., 2002)得知，第III型幾丁質酶保守序列「DXXDXDXE」中的D和E為影響酵素活性的兩個關鍵胺基酸，但我們發現在IIIa亞型的29個幾丁質酶中，有20個成員的這兩個關鍵胺基酸發生變異，可能會導致酵素活性或受質專一性的改變。若將此一因素列入考量，我們建議將IIIa亞型幾丁質酶進一步區分為兩個次亞型(sub-subclasses)，兩個關鍵胺基酸維持不變的九個成員為IIIa-1次亞型，而兩個關鍵胺基酸從D和E變異成F/Y和D的20個成員則為IIIa-2次亞型。如此，屬於III a-1次亞型的幾丁質酶彼此間胺基酸序列一致度也可提高到48-69%，而同屬IIIa-2次亞型內的幾丁質酶其胺基酸序列一致度則增加為43-85%。