以奈米鑽石進行特定胜肽之濃縮與萃取

Abstract

近年來，對於半胱胺酸上硫醇的氧化，研究上有許多進展，也受到很多的矚目，卻還沒有一種很適當的分析方法，因此我們有必要發展一套方法能針對這種蛋白質後轉移修飾進行濃縮萃取。針對此一目的，我們對過甲酸氧化的牛胰島素(Ox-BSA)做酵素消化並進行高選擇性和高靈敏度的濃縮和辨識，使用的原理是修飾在奈米鑽石表面的聚精胺酸，和胜肽上的磺酸化半胱胺酸之間的吸引力，並以MALDI質譜做最後分析工具。即使磺酸化胜肽的含量只有0.02%，修飾了聚精胺酸的奈米鑽石還是能從胰蛋白酵素消化的複雜胜肽中將其萃取出來。偵測極限方面，使用MALDI質譜可以在濃度低至10-9M時偵測得到。我們的實驗可以證明，對於磺酸化的胜肽，修飾了聚精胺酸的奈米鑽石不論在低濃度的情況，或是高度複雜的環境中，都是一種高效率的萃取功具。除此之外，我們還發現這種奈米鑽石對於多磺酸根的胜肽，比少磺酸根的胜肽，有更強的吸附效果。總之，我們的工作對於了解半胱胺酸氧化狀態，提供了一個全新的方法。